| Title: | Efecto de la L-carnitina sobre la criosupervivencia y capacidad fecundante de espermatozoides epididimarios caninos congelados y vitrificados |
| Authors: | Fernández Collahuazo, Jessica Paola
Ramón López, Angel Eduardo |
| metadata.dc.contributor.advisor: | Galarza Lucero, Diego Andrés |
| metadata.dc.ucuenca.correspondencia: | pao.fernandez9621@gmail.com
aeramonlopez@hotmail.com |
| metadata.dc.subject.other: | Criopreservación |
| Keywords: | Medicina Veterinaria
Perros
Congelación
Vitrificación |
| metadata.dc.ucuenca.areaconocimientounescoamplio: | 24 Ciencias de la Vida |
| metadata.dc.ucuenca.areaconocimientounescodetallado: | 2401.08 Genética Animal |
| metadata.dc.ucuenca.areaconocimientounescoespecifico: | 3109 Ciencias Veterinarias |
| Issue Date: | 13-Sep-2022 |
| Publisher: | Universidad de Cuenca |
| metadata.dc.description.city: | Cuenca |
| Series/Report no.: | TV;405 |
| metadata.dc.type: | bachelorThesis |
| Abstract: | This work aimed to evaluate the effect of L-carnitine added to freezing and
vitrification mediums on cryosurvival and fertilizing ability of dog epididymal
spermatozoa. For this purpose, sperm was recovered from 60 epididymides from 30
ovariectomized adult dogs by retrograde flushing. Subsequently, twenty pool sperm
samples were formed (3 epididymal samples/pool). Each pool was divided into two
aliquots: one for freezing, and another for vitrification. For the freezing process, the
TCG-EY extender (Tris, citric acid, glucose, 20% egg yolk) with 5% glycerol and
supplemented with 5mM (T1) and 0mM (T2, control 1) L-carnitine were used. For
the vitrification process, the TCG-EY extender plus 250 mM sucrose and
supplemented with 5 mM (T3) and 0 mM (T4, control 2) of L-carnitine were utilized.
The kinematics, membrane integrities, and fertilizing ability of all sperm samples (T1
- T4) were assessed using a CASA system (SCA®-2018), PI-PNA-FITC double
fluorescence test, and heterologous in vitro fertilization (IVF) with zona-intact bovine
oocytes, respectively. After cryopreservation, the results showed that the freezing
method yielded greater values (P<0.05) of progressive motility (PM), curvilinear
(VCL) and rectilinear (VSL) velocities, and beat-cross frequency (BCF) than the
vitrification method, irrespective of L-carnitine addition. L-carnitine did not improve
(P>0.05) any kinematic variables of frozen or vitrified sperm. However, L-carnitine
showed a cryoprotective effect due to an improvement (P < 0.05) in the proportion
of sperm with intact plasma membrane/intact acrosome after the freezing and
vitrification process. Concerning fertilizing ability, it was evidenced that the samples
frozen with L-carnitine obtained a higher proportion of pronuclei formed compared
to vitrified samples without L-carnitine. In conclusion, the addition of L-carnitine to
the freezing and vitrification mediums has a positive cryoprotective effect on the
plasmalemma and acrosome membrane, even fertilizing ability of dog epididymal
spermatozoa. |
| Description: | El objetivo de esta investigación fue evaluar el efecto de la L-carnitina adicionada a
diluyentes de congelación y vitrificación, sobre la criosupervivencia y capacidad
fecundante en esperma epididimario de perro. Para esto, se recuperó el esperma
de 60 epidídimos provenientes de 30 perros adultos orquiectomizados mediante
flujo retrógrado. Posteriormente se conformaron veinte agrupaciones o pools de
esperma (3 muestras epididimarias/pool). Cada pool se dividió en 2 alícuotas, una
para congelación y otra para vitrificación. Para la congelación, se usó el diluyente
TCG-EY (Tris, ácido cítrico, glucosa, 20% yema de huevo) y 5% de glicerol y se
suplementó con 5mM (T1) y 0mM (T2, control 1) de L-carnitina; y para la vitrificación
se usó el diluyente TCG-EY y 250 mM de sacarosa y se suplementó con 5 mM (T3)
y 0 mM (T4, control 2) de L-carnitina. La cinemática, integridad de las membranas y
capacidad fecundante fue evaluada de las muestras espermáticas de los
tratamientos T1, T2, T3 y T4, mediante un sistema computarizado CASA (SCA®-
2018), doble tinción fluorescente PI-PNA-FITC y FIV heteróloga (ovocitos bovinos),
respectivamente. Después de la criopreservación, los resultados demostraron que
el método de congelación produjo valores más altos (P<0,05) de motilidad
progresiva (MP), velocidad curvilínea (VCL) y rectilínea (VSL), y frecuencia de
batida de flagelo (BCF) que el método de vitrificación, independientemente de la
adición de L-carnitina. La L-carnitina no mejoró (P>0,05) ningún parámetro
cinemático de espermatozoides congelados o vitrificados. Sin embargo, L-carnitina,
evidenció un efecto crioprotector debido a un incremento (P < 0,05) del porcentaje
de espermatozoides con membrana plasmática intacta y acrosoma intacto después
del proceso de congelación y vitrificación. En la evaluación de la capacidad
fecundante, se evidenció que las muestras congeladas con L-carnitina obtuvieron
una mayor proporción pronúcleos formados comparados con muestras vitrificadas
sin L-carnitina (P < 0,05). En conclusión, la adición de L-carnitina a los diluyentes
de congelación y vitrificación, demostró un efecto benéfico crioprotector del
plasmalema y acrosoma, incluso de la capacidad fecundante de espermatozoides
epididimarios de perro. |
| metadata.dc.description.degree: | Médico Veterinario Zootecnista |
| URI: | http://dspace.ucuenca.edu.ec/handle/123456789/39854 |
| Appears in Collections: | Tesis de Pregrado
|
